苏微免疫亲和柱测定液相色谱条件--黄曲霉毒素B1免疫亲和柱

黄曲霉毒素B₁免疫亲和柱净化--高效液相测定方法

1.配制黄曲霉毒素B₁标准品：

1.1 标准品

黄曲霉毒素B₁（AFB₁，纯度≥98.0%），浓度1.9μg/mL，购于国家粮食局标准物质中心。

1.2 标准溶液配制：

1.2.1 标准储备液：用移液管准确移取0.5mL1.9μg/mL浓标至5mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，配制成浓度为190ng/mL的标准储备液，-20℃避光保存。

1.2.2系列标准工作液：根据需要用移液管准确移取适量标准储备液，用流动相定容至刻度，配制成浓度分别为1.9ng/mL、3.8ng/mL、7.6ng/mL、19ng/mL、38ng/mL的系列标准工作液，-20℃避光保存。三个月内有效。

2.免疫亲和柱净化后测定

2.1 黄曲霉毒素B₁免疫亲和柱净--高效液相色谱测定参考条件：

a) 色谱柱：Sepax Amethyst C18-H柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒度4μm；

b) 流动相：甲醇-水（50:50，体积比）；

c) 流速：0.8mL/min；

d) 检测波长：激发波长365nm，发射波长440nm；

e) 进样量：20μL；

f) 柱后光化学衍生器；

g) 柱温：40℃。

2.2 标准曲线的制作

将系列AFB₁标准工作液按浓度从低到高依次注入高效液相色谱仪，得到相应的峰面积。以目标物质的浓度为横坐标，目标物质的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2.3 试样溶液的测定

将经黄曲霉毒素免疫亲和柱净化后的待测试样溶液注入高效液相色谱仪，得到AFB₁的峰面积。由标准曲线计算得到试样溶液中AFB₁的浓度。

2.4 AFB₁参考谱图：