苏微免疫亲和柱测定液相色谱条件--黄曲霉毒素M1免疫亲和柱

黄曲霉毒素M₁高效液相测定方法

1.配制标准品：

1.1 黄曲霉毒素M₁标准品

黄曲霉毒素M₁（AFM₁，纯度≥98.0%），浓度10μg/mL，购于Sigma试剂公司。

1.2 标准溶液配制：

1.2.1 标准储备液：用100μL进样针准确移取0.1mL10μg/mL浓标至5mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，配制成浓度为200ng/mL的标准储备液，-20℃避光保存。

1.2.2系列标准工作液：根据需要用移液管或进样针准确移取适量标准储备液，用流动相定容至刻度，配制成浓度分别为1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL的系列标准工作液，-20℃避光保存。三个月内有效。

2.测定

2.1 黄曲霉毒素M₁免疫亲和柱净化--高效液相色谱参考条件：

a) 色谱柱：Sepax Amethyst C18-H柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度4μm；

b) 流动相：乙腈-水（25:75，体积比）；

c) 流速：0.8mL/min；

d) 检测波长：激发波长365nm，发射波长440nm；

e) 进样量：20μL；

f) 柱温：40℃。

2.2 标准曲线的制作

将系列AFM₁标准工作液按浓度从低到高依次注入高效液相色谱仪，得到相应的峰面积。以目标物质的浓度为横坐标，目标物质的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2.3 试样溶液的测定

将黄曲霉毒素M₁免疫亲和柱净化后待测试样溶液注入高效液相色谱仪，得到AFM₁的峰面积。由标准曲线计算得到试样溶液中AFM₁的浓度。

2.4 AFM₁参考谱图：