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苏微免疫亲和柱测定液相色谱条件--黄曲霉毒素M1免疫亲和柱

文章出处:admin责任编辑:苏微人气: 发表时间2020/9/1 9:57:09【
 

黄曲霉毒素M1高效液相测定方法

1.配制标准品:

1.1 黄曲霉毒素M1标准品

黄曲霉毒素M1(AFM1,纯度≥98.0%),浓度10μg/mL,购于Sigma试剂公司。

1.2 标准溶液配制:

1.2.1 标准储备液:用100μL进样针准确移取0.1mL10μg/mL浓标至5mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,配制成浓度为200ng/mL的标准储备液,-20℃避光保存。

1.2.2系列标准工作液:根据需要用移液管或进样针准确移取适量标准储备液,用流动相定容至刻度,配制成浓度分别为1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL的系列标准工作液,-20℃避光保存。三个月内有效。

 

2.测定

2.1 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱净化--高效液相色谱参考条件:

a) 色谱柱:Sepax Amethyst C18-H柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒度4μm;

b) 流动相:乙腈-水(25:75,体积比);

c) 流速:0.8mL/min;

d) 检测波长:激发波长365nm,发射波长440nm;

e) 进样量:20μL;

f) 柱温:40℃。

2.2 标准曲线的制作

将系列AFM1标准工作液按浓度从低到高依次注入高效液相色谱仪,得到相应的峰面积。以目标物质的浓度为横坐标,目标物质的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2.3 试样溶液的测定

黄曲霉毒素M1免疫亲和柱净化后待测试样溶液注入高效液相色谱仪,得到AFM1的峰面积。由标准曲线计算得到试样溶液中AFM1的浓度。

2.4 AFM1参考谱图:

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