苏微免疫亲和柱测定液相色谱条件--黄曲霉毒素总量免疫亲和柱

黄曲霉毒素总量免疫亲和柱净化--高效液相测定方法

1.配制标准品：

1.1 标准品

黄曲霉毒素总量（AFT，纯度≥98.0%），其中AFB₁、AFG₁、AFB₂、AFG₂浓度分别为1.06μg/mL、0.95μg/mL、0.33μg/mL、0.29μg/mL，购于Sigma试剂公司。

1.2 标准溶液配制：

1.2.1 标准储备液：用移液管准确移取0.5mL原浓度标准品至5mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，配制成AFB₁、AFG₁、AFB₂、AFG₂浓度分别为106ng/mL、95ng/mL、33ng/mL、29ng/mL的标准储备液，-20℃避光保存。

1.2.2系列标准工作液：根据需要用移液管准确移取适量标准储备液，用流动相定容至刻度，配制成AFB₁浓度为2.12ng/mL、4.24ng/mL、8.48ng/mL、10.6ng/mL、21.2ng/mL，AFG₁浓度为1.9ng/mL、3.8ng/mL、7.6ng/mL、9.5ng/mL、19ng/mL，AFB₂浓度为0.66ng/mL、1.32ng/mL、2.64ng/mL、3.3ng/mL、6.6ng/mL，AFG₂浓度为0.58ng/mL、1.16ng/mL、2.32ng/mL、2.9ng/mL、5.8ng/mL的系列标准工作液，-20℃避光保存。三个月内有效。

2.测定

2.1 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱净化--高效液相色谱参考条件：

a) 色谱柱：Hexi C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度4μm；

b) 流动相：甲醇-水（45:55，体积比）；

c) 流速：0.8mL/min；

d) 检测波长：激发波长365nm，发射波长440nm；

e) 进样量：20μL；

f) 柱后光化学衍生器；

g) 柱温：40℃。

2.2 标准曲线的制作

将系列AFT标准工作液按浓度从低到高依次注入高效液相色谱仪，得到相应的峰面积。以目标物质的浓度为横坐标，目标物质的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2.3 试样溶液的测定

将黄曲霉毒素总量免疫亲和柱净化后待测试样溶液注入高效液相色谱仪，得到AFT的峰面积。由标准曲线计算得到试样溶液中AFT的浓度。

2.4 AFT参考谱图：

注：目标物质AFB₁、AFG₁、AFB₂、AFG₂出峰时间依次为8.752min、10.225min、12.284min、14.737min。